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对虾传染性肌肉坏死病毒(IMNV)核酸检测试剂盒

对虾传染性肌肉坏死病毒(IMNV)核酸检测试剂盒

更新时间:2023-05-10

访问量:47

厂商性质:生产厂家

生产地址:上海市

简要描述:
对虾传染性肌肉坏死病毒(IMNV)核酸检测试剂盒具有准确性高,操作简便等特点。我司将持续创新,致力于为客户提供更好的质量和服务。产品优惠活动进行中,欢迎新老客户来选购。

产品名称:对虾传染性肌肉坏死病毒(IMNV)核酸检测试剂盒
产品货号:YQ-D-0271
包装规格:50T/盒
检测方法:实时荧光PCR法
储存及有效期:-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融次数不超过5次,有效期12 个月。

适用仪器 :ABI、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列荧光定量 PCR检测仪。

本采集:对于急性呼吸道型的病禽,用棉拭子取气管渗出物,放于1mL50%甘油生理盐水中;对于刚扑杀的病禽,采取支气管和肺组织;对于肾型和产蛋下降型的病禽,应采取发病鸡的肾脏或输卵管。

保存和运输:

上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过 6个月,标本运送应采用 2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。

对虾传染性肌肉坏死病毒(IMNV)核酸检测试剂盒的原理

本试剂盒采用TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术,设计一对对虾传染性肌肉坏死病毒(IMNV)特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR 技术对对虾传染性肌肉坏死病毒(IMNV)的DNA或RNA进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

试剂盒主要组成成分

包装规格

25T/盒

50T/盒

 反应液

500μL×1管

500μL×2管

酶液

25μL×1管

50μL×1管

阳性质控品

50μL ×1管

50μL ×1管

阴性质控品

250μL ×1管

250μL ×1管

实时荧光PCR的特点

1. 灵敏度高,操作简便。

2. 节省时间。  

3.准确性高,特异性好,假阳性低。

4.一管式荧光定量pcr检测,避免后续污染。

5.对原始材料质t要求低。

6. 仅供科研不得用于临床诊断使用。

使用方法

1.样品处理(样本处理区)

1.1样本前处理

每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g,手术jian剪碎混匀后取 0.5g于研磨器中研磨,加入1.5mL生

理盐水后继续研磨,待匀浆后转至1.5mL离心管中,8000rpm离心 2min,取上清液 100μL于1.5mL离 心管中;棉拭子直接取 100μL于 1.5mL离心管中。

1.2.核酸提qu

推荐采用核酸提qu或纯hua试剂(磁珠法或离心柱法)进行核酸提qu,请按照试剂说明书进行操作。

2.试剂配制(试剂准备区)

根据待检测样本总数,设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照;反应管数每满10份,多配制1份),每测试反应体系配制如下表:

试剂

AIBV 反应液

酶液

用量

20μL

1μL


将混合好的测试反应液分装到PCR反应管中,21uL/管。

3.加样(样本处理区)

将步骤1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心

4.PCR扩增(核酸扩增区)

4.1将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内;

4.2设置好通道、样品信息,反应体系设置为25μL;

荧光通道选择:检测通道(ReporterDye)FAM,淬灭通道(QuencherDye)NONE,ABI系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光,选择None即可。

4.3推荐循环参数设置:


步骤

循环数

温度

时间

收集荧光信号

1

1 cycle

42℃

20min

2

1 cycle

95℃

10min

3

40 cycles

94℃

15sec

55℃

30sec


对虾传染性肌肉坏死病毒(IMNV)核酸检测试剂盒

5.1结果分析条件设定

5.结果分析判定
设置Baseline和Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节Baseline的 start 值(一般可在 3~15范围内调节)、stop 值(一般可在5~20 范围内调节),以及Threshold的Value值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。

5.2结果判断

阳性:检测通道Ct值≤35,且曲线有明显的指数增长曲线;

可疑:检测通道35<Ct 值≤38,建议重复检测,如果检测通道仍为35<Ct 值≤38,且曲线有明显的增长曲线,判定为阳性,否则为阴性;

阴性:样本检测结果Ct值>38或无 Ct 值。

6.质控标准

阴性质控品:Ct>38或无 Ct值显示;

阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且Ct 值≤32;

以上条件应同时满足,否则实验视为无效。

7.检测方法的局限性

1.样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;

2.样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;

3.阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;

4.病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;

5.不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;

6.试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;

7.本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

注意事项

1.所有操作严格按照说明书进行;

2.试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完quan混匀并短暂离心;

3.反应液应避光保存;

4.反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;

5.使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;

6.样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;

7.实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;

8.试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

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