小鼠铁蛋白（FE）ELISA试剂盒操作步骤

　　

　　检测原理：

　　小鼠铁蛋白（FE）ELISA试剂盒用小鼠FE抗原包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的小鼠FE与包被的小鼠FE竞争生物素标记的抗小鼠FE单抗上的结合位点，游离的成分被洗去。加入辣根过氧化物酶标记的亲和素，生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，小鼠FE浓度与OD450值之间呈反比，通过绘制标准曲线计算出样品中小鼠FE的浓度。

　　

　　操作步骤：

　　1、对应板孔中加入50μL标准品工作液或样本后，立即每孔加入50μL生物素化抗体工作液，37℃孵育45分钟；

　　2、弃掉板内液体，洗板3次；

　　3、每孔加入100μLHRP酶结合物工作液，37℃孵育30分钟，弃掉板内液体，洗板5次；

　　4、每孔加入90μL底物溶液，37℃孵育15分钟左右；

　　5、每孔加入50μL终止液；

　　6、立即在450nm波长下读数，处理数据。

　　

　　基因工程试剂对免疫测定技术发展的影响：

　　免疫测定技术的基础在于抗原抗体之间的特异结合反应，所以任何优质的诊断试剂离不开优质的原料，如抗原抗体，酶等。以前用于免疫测定的抗原通常为各种纯化抗原，而抗体则为纯化抗原免疫动物后获得的多克隆抗体和使用杂交瘤技术得到的单克隆抗体，而抗原或抗体的标记物如酶标结合物则通过各总化学合成方法制备。近年来，随着分子生物学的发展，使用基因工程方法制备各种特殊的抗原或抗体及其酶结合物等免疫测定试剂几成为现实的新一代试剂，各种新型使用的测定方法也不断出现。