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关于鸡ELISA试剂盒,那些不得不说的事

发布时间:2021-09-15   点击次数:80次
   鸡ELISA试剂盒溶菌酶可与等电点较低的蛋白有强的结合能力。免疫球蛋白等电点约为5,因此,在双抗体夹心法ELISA试剂盒测定中,溶菌酶可在包被的IgG和酶标的IgG间形成桥接,从而导致假阳性。因此,为保证ELISA试剂盒测定的可靠性,有必要从标本中去除溶菌酶或将其封闭,Cu2+离子和卵白蛋白可有效地封闭溶菌酶,防止其连接IgG。
  Elisa生物试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中。
  鸡ELISA试剂盒由补体引起的干扰可通过下述方法避免:
  (1)对临床血清标本加热灭活补体:采用56~C30 min加热可使标本中的补体C1。灭活。
  (2)包被或酶标二抗使用特异的鸡抗体:鸡抗体不激活人的补体系统,因此,使用特异的鸡抗体,不会出现因补体激活而存在的假阳性和假阴性干扰。
  异嗜性抗体人类血清中含有抗啮齿类动物(如鼠、马、羊等)的免疫球蛋白(1g)的抗体,即天然的异嗜性抗体。有研究表明,天然的异嗜性抗体(1gG)可分为两类,一类(85%的假阳性由其引起)可结合于山羊、小鼠、大鼠、马和牛IgG的Fab区域,但不与兔IgG的Fab区结合。另一类(15%的假阳性由其引起)可结合于小鼠、马、牛和兔IgG的Fc区表位,但不与山羊和大鼠IgG的Pc区表位结合。异嗜性抗体可通过交联固相和酶标的单抗或多抗而出现假阳性反应。
  鸡ELISA试剂盒由异嗜性抗体引起的干扰可通过下述方法避免:
  (1)该试剂盒使用特异的兔F(ab’)2。片段作为固相或测定酶标抗体。
  (2)在标本或标本稀释液中加入过量的动物Ig,封闭可能存在的异嗜性抗体。但加入量不足或亚类不同时无效。
  (3)使用靶特异的非Ig亲和蛋白替代固相或酶标抗体之一。采用噬菌体展示技术展示来自单个金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)联合文库的人IgA结合亲和蛋白,用于IgA的测定,不受异嗜性抗体的影响。
  (4)使用特异的鸡抗体作为固相和测定抗体。
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