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人端粒酶(TE)ELISA试剂盒操作步骤

发布时间:2022-11-12   点击次数:51次
   人端粒酶(TE)ELISA试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人端粒酶(TE)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人端粒酶(TE)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
  
  操作步骤:
  1、从室温平衡60min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
  2、设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
  3、待测样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;
  4、随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
  5、弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
  6、每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  7、每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
  
  操作注意事项:
  1、试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡60分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶溶解后再使用。样本在使用前也要在室温平衡60分钟。
  2、实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
  3、预处理后的样本无需稀释,直接取10μL加样即可。
  4、严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
  5、所有液体组分使用前充分摇匀。
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