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大鼠骨保护素(OPG)ELISA试剂盒实验原理及操作步骤

发布时间:2022-10-20   点击次数:87次
   大鼠骨保护素(OPG)ELISA试剂盒主要是用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中骨保护素(OPG)含量,应用双抗体夹心法测定标本中大鼠骨保护素(OPG)水平。用纯化的大鼠骨保护素(OPG)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入骨保护素(OPG)再与HRP标记的骨保护素(OPG)抗体结合,形成抗体抗原酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的骨保护素(OPG)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠骨保护素(OPG)浓度。
  
  操作步骤:
  1、从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
  2、设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;样本孔加待测样本50μL。
  3、样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
  4、除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
  5、弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
  6、每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  7、每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
  8、结果判断绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
  
  实验原理:
  大鼠骨保护素(OPG)ELISA试剂盒用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗C3抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗C3抗体、HRP标记的亲和素,经过*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的C3呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
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