大鼠骨保护素(OPG）ELISA试剂盒实验原理及操作步骤
发布时间：2022-10-20 点击次数：354次
大鼠骨保护素(OPG）ELISA试剂盒主要是用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中骨保护素(OPG)含量，应用双抗体夹心法测定标本中大鼠骨保护素(OPG)水平。用纯化的大鼠骨保护素(OPG)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入骨保护素(OPG)再与HRP标记的骨保护素(OPG)抗体结合，形成抗体抗原酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的骨保护素(OPG)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠骨保护素(OPG)浓度。
操作步骤：
1、从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2、设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔加待测样本50μL。
3、样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。
4、除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5、弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6、每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7、每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
8、结果判断绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
实验原理：
大鼠骨保护素(OPG）ELISA试剂盒用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗C3抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗C3抗体、HRP标记的亲和素，经过*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的C3呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。
