总抗氧化能力（T-AOC）试剂盒说明书（ABTS 法）

一、产品简介：

ABTS 在适当的氧化剂作用下氧化成绿色的 ABTS+，在抗氧化物存在时 ABTS+的产生会被抑制，在 734nm 或 414nm 测定ABTS+的吸光度即可测定并计算出样品的总抗氧化能力。Trolox 是一种wei生素 E 的类似物，具有和wei生素 E 相近的抗氧化能力，用作其它抗氧化物总抗氧化能力的参考。

二、试剂盒的组成和配制：

试剂名称规格保存要求备注

试剂一粉剂 mg×1 支4℃保存临用前甩几下使粉剂落入底部，再

加 1.47mL 蒸馏水，充分溶解备用。

试剂二粉剂 mg×1 支4℃保存临用前甩几下使粉剂落入底部，再

加 2.86mL 蒸馏水，充分溶解备用。

标准品液体×1 支4℃保存

若重新做标曲，则用到该试剂

工作液配置：临用前将加水溶解后的试剂一和试剂二按照 1:1 比例混合，避光反应 12h 后（二天内用完），再用 PBS 或无水乙醇稀释 40 倍备用，当待检测样品为水溶性样品时，用 PBS 稀释；当待检测样品为非水溶性样品时，用 80%乙醇稀释（最好现配现用）。

三、所需的仪器和用品：

可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、无水乙醇和蒸馏水。

四、总抗氧化能力测定：

建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

注：样品中不能添加 DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的物质，也不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢剂。

1、样本制备：

① 组织样本：

称取约 0.1g 组织，冰浴低温匀浆，加入 1mL 的冷 PBS（水溶性样本）或 80%乙醇（非水溶性样本），进行冰浴匀浆，匀浆后转入离心管中。12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取

② 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。

2、上机检测：

可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 414nm，蒸馏水调零。

不同样本清除能力不一，可先选取 2 个样本做检测，若 A 测定-A 对照接近零，需对样本进行稀释（稀释液与组织提取液一致，即水溶性样本用 PBS 或蒸馏水稀释，非水溶性样本用 80%乙醇稀释）后再检测，稀释倍数 D 代入公式计算。

在 EP 管中依次加入：

试剂名称（μL）测定管对照管空白管（做一次）

样本4040

PBS 或 80%乙醇76040

工作液760760

【注】若一次性样本较多，可用排枪或者分批检测，以使测定管的反应时间（避光静置 6min） 保持一致。

五、结果计算：

1、标准曲线：y = 3.3471x-0.0291，x 是标准品 Trolox 摩尔浓度（μmol/mL），y 是△A。

2、按样本质量计算：

总抗氧化能力(μmol Trolox/g 鲜重)=[(𝗈A+0.0291)÷3.3471×V1]÷(V1÷V×W) ×D

=0.3×(𝗈A+0.0291)÷W×D

3、液体样本：

总抗氧化能力(μmol Trolox/mL)=[(𝗈A+0.0291)÷3.3471×V1]÷V1×D

=0.3×(𝗈A+0.0291)×D

V----加入提取液体积，1 mL；V1反应中样品体积，40μL=0.04 mL；

W----样品质量，g；Trolox 分子量250.29

附：标准曲线制作过程：

1标准品母液（2mM）。

2把母液用相应的提取液稀释成以下浓度梯度的标准品：0，0.08，0.16，0.24，0.32，

0.4 mM。也可根据实际样本来调整标准品浓度。

3按照测定管加样体系操作，依据结果即可制作标准曲线。