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总抗氧化能力(T-AOC)试剂盒说明书(ABTS 法)

发布时间:2022-08-17   点击次数:366次


一、产品简介:

ABTS 在适当的氧化剂作用下氧化成绿色的 ABTS+,在抗氧化物存在时 ABTS+的产生会被抑制,在 734nm 或 414nm 测定ABTS+的吸光度即可测定并计算出样品的总抗氧化能力。Trolox 是一种wei生素 E 的类似物,具有和wei生素 E 相近的抗氧化能力,用作其它抗氧化物总抗氧化能力的参考。

二、试剂盒的组成和配制:

试剂名称规格保存要求备注

试剂一粉剂 mg×1 支4℃保存临用前甩几下使粉剂落入底部,再

加 1.47mL 蒸馏水,充分溶解备用。

试剂二粉剂 mg×1 支4℃保存临用前甩几下使粉剂落入底部,再

加 2.86mL 蒸馏水,充分溶解备用。

标准品液体×1 支4℃保存

若重新做标曲,则用到该试剂

工作液配置:临用前将加水溶解后的试剂一和试剂二按照 1:1 比例混合,避光反应 12h 后(二天内用完),再用 PBS 或无水乙醇稀释 40 倍备用,当待检测样品为水溶性样品时,用 PBS 稀释;当待检测样品为非水溶性样品时,用 80%乙醇稀释(最好现配现用)。

三、所需的仪器和用品:

可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、无水乙醇和蒸馏水。

四、总抗氧化能力测定:

建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!

注:样品中不能添加 DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的物质,也不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢剂。

1、样本制备:

① 组织样本:

称取约 0.1g 组织,冰浴低温匀浆,加入 1mL 的冷 PBS(水溶性样本)或 80%乙醇(非水溶性样本),进行冰浴匀浆,匀浆后转入离心管中。12000rpm,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例进行提取

② 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。

2、上机检测:

可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 414nm,蒸馏水调零。

不同样本清除能力不一,可先选取 2 个样本做检测,若 A 测定-A 对照接近零,需对样本进行稀释(稀释液与组织提取液一致,即水溶性样本用 PBS 或蒸馏水稀释,非水溶性样本用 80%乙醇稀释)后再检测,稀释倍数 D 代入公式计算。

在 EP 管中依次加入:

试剂名称(μL)测定管对照管空白管(做一次)

样本4040

PBS 或 80%乙醇76040

工作液760760





【注】若一次性样本较多,可用排枪或者分批检测,以使测定管的反应时间(避光静置 6min) 保持一致。

五、结果计算:

1、标准曲线:y = 3.3471x-0.0291,x 是标准品 Trolox 摩尔浓度(μmol/mL),y 是△A。

2、按样本质量计算:

总抗氧化能力(μmol Trolox/g 鲜重)=[(𝗈A+0.0291)÷3.3471×V1]÷(V1÷V×W) ×D

=0.3×(𝗈A+0.0291)÷W×D

3、液体样本:

总抗氧化能力(μmol Trolox/mL)=[(𝗈A+0.0291)÷3.3471×V1]÷V1×D

=0.3×(𝗈A+0.0291)×D






V----加入提取液体积,1 mL;V1反应中样品体积,40μL=0.04 mL;

W----样品质量,g;Trolox 分子量250.29



附:标准曲线制作过程:

1标准品母液(2mM)。

2把母液用相应的提取液稀释成以下浓度梯度的标准品:0,0.08,0.16,0.24,0.32,

0.4 mM。也可根据实际样本来调整标准品浓度。

3按照测定管加样体系操作,依据结果即可制作标准曲线。

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