一、产品简介：

乙醛脱氢酶（ALDH，EC  1.2.1.10）是醛脱氢酶的一种，广泛存在于各种动物、植物和微生物体内。主要作用是将乙醛氧化成乙酸，在酒精代谢中起主要作用。

本公司提供一种简单，快速，可靠的定量 ALDH 酶活性的方法。在这个测定中，乙醛被 ALDH 氧化产生 NADH，然后将无色探针还原成有色产物，在 450nm 处具有强吸光度， 即可得到乙醛脱氢酶（ALDH）酶活性大小。

二、试剂盒的组成和配制：

三、所需的仪器和用品：

酶标仪、96 孔板、可调式移液器、研钵、天平、离心机、蒸馏水。

四、乙醛脱氢酶（ALDH）酶活测定：

建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、样本制备：

① 组织样本

称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm，4℃离心 10min， 取上清置冰上待测。

【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取

② 液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。

2、上机检测：

① 酶标仪预热 30 min 以上，调节波长到 450nm。

② 依次在 96 孔板中加入：

【注】若△A 值在零附近徘徊，可加大样本量（如：40µL，则试剂三相应减少），或者延长反应时间 T，则改变后的样本体积 V1 和反应时间 T 需代入计算公式重新计算。

五、结果计算：

1、标准曲线：y = 0.0364x - 0.0069；x 是 NADH 摩尔质量（nmol），y 是ΔA。

2、按蛋白浓度计算

酶活定义：每毫克蛋白每分钟催化生成 1nmol NADH 的酶量为 1 个酶活单位。

ALDH 酶活（nmol/min/mg prot）=[（ΔA+0.0099）÷0.1031]÷(Cpr×V1÷V) ÷T

= 16.17×（ΔA+0.0099）÷Cpr

3、按样本质量计算

酶活定义：每克样品每分钟催化生成 1nmol NADH 的酶量为 1 个酶活单位。

ALDH 酶活（nmol/min/g 鲜重）=[（ΔA+0.0099）÷0.1031] ÷(W×V1÷V) ÷T

= 16.17×（ΔA+0.0099）÷W

4、按液体体积计算

酶活定义：每毫升液体样本每分钟催化生成 1nmol NADH 的酶量为 1 个酶活单位。

ALDH 酶活（nmol/min/mL）= [（ΔA+0.0099）÷0.1031] ÷V1÷T

= 16.17×（ΔA+0.0099）

V---加入提取液体积，1 mL； V1---加入样本体积，0.02 mL； T----反应时间，30 min； W 样本质量，g；

Cpr 样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。