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PCR试剂盒注意事项

发布时间:2022-06-27   点击次数:297次



1. 样品处理(样本处理区)

1.1 样本前处理

取动物组织及其制品食品或饲料1g手术剪剪碎混匀后0.5g于研磨器中研磨1.5mL理盐水后 继续研待匀浆后转至 1.5mL灭菌离心管中8000rpm2min取上清100μL1.5mL灭菌离心管中。

1.2 核酸提取

推荐广份有限公剂(磁珠酸提取,请按照试剂说明书进行操作。

2. 试剂配制(试剂准备区)

根据待检测样本总数设所需要的 PCR反应管管数为 N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照样品每满

10 份,多配1 ),每测试反应体系配制如下表:

试剂

Chicken反应液

酶液

用量(样本数为 N

20μL

1μL

将混合好的测试反应液分装到 PCR反应管中,21uL/管。

3. 加样(样本处理区)

将步1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各4μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。

4. PCR扩增(核酸扩增区)

4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR仪反应槽内;

4.2 设置好通道、样品信息,反应体系设置25μL

荧光 Reporter DyeFAM 道(Quencher DyeNONEABI选择ROX参比荧光,选择 None即可。

【注意事项】

1.所有操作严格按照说明书进行;

2.试剂盒内各种组分使用前应自然融化,*混匀并短暂离心;

3.反应液应避光保存;

4.反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;

5.使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;

6.样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;

7.实验完毕后10%次氯酸75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;

8.试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


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